'n Fluoressensiemikroskoop is 'n tipe optiese mikroskoop wat 'n hoë-intensiteit ligbron gebruik om die monster te verlig en fluorochrome in die monster op te wek. Die verligting van die monster word gewoonlik gedoen met 'n ligbron wat ultraviolet lig uitstraal. Hulle word wyd gebruik in biologiese, mediese en industriële velde.
Hoe werk 'n fluoressensiemikroskoop?
’n Fluoresensiemikroskoop gebruik ’n kwik- of xenonlamp om ultravioletlig te produseer. Die lig kom in die mikroskoop en tref 'n dichroïese spieël - 'n spieël wat een reeks golflengtes weerkaats en 'n ander reeks toelaat om deur te gaan. Die dichroïese spieël weerkaats die ultraviolet lig tot by die monster. Sommige monsters fluoresseer natuurlik onder ultraviolet lig omdat hulle fluoresserende stowwe soos chlorofil bevat. As die monster wat bekyk moet word nie natuurlik fluoresseer nie, kan dit gekleur word met fluoresserende kleurstowwe genoem fluorochrome.
Waaruit bestaan 'n fluoressensiemikroskoop?
1. Ligbron
Die mees algemene ligbronne is kwik, xenon en LED's. Mercurius verskaf die beste kwaliteit lig vir fluoressensiemikroskoop. LED's word meer gewild omdat hulle goedkoper is as ander bronne en minder krag verbruik.
| Kwik lamp | Xenon lamp | LED | |
| Golflengte van die uitgestraalde lig | 350-370 nm | 400nm ~ 450nm | 400-700 nm |
| Leeftyd (uur) | 200-300 | 400-600 | 10 000 |
| Voordeel | 1. Hoë-intensiteit lig, die mees algemene ligbronne. 2. Dit straal sterk ultraviolet en blou-violet uit om alle soorte fluorofore op te wek. 3. Helder en kleurvolle beelde. | 1. Die spektrale intensiteit is stabiel. 2. Sterk spektrale intensiteit in die infrarooi en middel-infrarooi. | 1. Maklik om te vervang. 2. Nie nodig om op te warm nie. 3. Kan onmiddellik aan- en afgeskakel word. 4. Beheer ligbronintensiteit. |
| Nadeel | 1. 'n Kort leeftyd. 2. Lang opwarmtyd. | 1. Spesiale laespanning GS-kragboks word benodig vir oortollige hitte. 2. Duurder as Mercury Lamp | 1. UV-lig is swakker as kwiklamp. 2.Elke golflengte van lig vereis 'n aparte LED as gevolg van die smal bandwydtes wat hulle uitstraal. |
Mercury Fluorescent Attachment
LED Fluorescent Aanhegsel
2. Opwekkingsfilter
Die opwekkingsfilter is noodsaaklik vir die werking van 'n fluoressensiemikroskoop. Dit laat die lig van 'n korter golflengte verby, wat die fluoresserende kleurstof kan absorbeer. Dit blokkeer ook die ander bronne van opwindende lig.
Opwekkingsfilter (B,G,U,V)
3. Dichroïese spieël
Die dichroïese spieël is 'n tipe optiese filter wat lig op sekere golflengtes weerkaats terwyl dit ander uitstuur. Dit word in fluoressensiemikroskope gebruik om die opwekkings- en emissiegolflengtes te skei.
4. Emissiefilter
Die emissiefilter slaag slegs die golflengtes wat deur die fluorofoor uitgestraal word en blokkeer alle ongewenste lig buite hierdie band – veral die opwekkingsgolflengtes.
5. Fluorescerende kleurstowwe
Fluorescerende kleurstowwe is organiese verbindings wat 'n eienskap van fluoressensie besit, waardeur hulle 'n fluoresserende beeld kan vorm deur hoogs kontras sigbare groen lig uit te straal nadat hulle deur die hoogs verligtende ultraviolet lig opgewonde geraak het. Algemeen gebruikte fluoresserende kleurstowwe is; DAPI (49,6-diamidino-2-phenylindole), akridien-oranje, auramine-rhodamine, Alexa Fluors of DyLight 488.
Hoeveel tipes fluoressensiemikroskope?
1. Regop Epifluoressensie Mikroskoop:
Dit is die mees algemene tipe fluoressensiemikroskoop. Die opwekking van die fluorofoor en opsporing van die fluoressensie word deur dieselfde ligpad (dws deur die objektief) gedoen. Die meerderheid fluoressensiemikroskope, veral dié wat in die lewenswetenskappe gebruik word, is van die epifluoressensie-ontwerp.
BS-2081F Navorsing Fluorescent Biologiese Mikroskoop
2. Konfokale fluoressensiemikroskoop:
Konfokale fluoressensiemikroskoop: Hierdie tipe fluoressensiemikroskoop kombineer laserskandering met fluoresserende beligting om 'n beeld te produseer. Dit kan in 'n wye reeks toepassings gebruik word, soos om selle en weefsels te bestudeer, proteïene en ander stowwe binne selle op te spoor, en die dikte van materiale te meet.
BS-2081F Navorsing Fluorescent Biologiese Mikroskoop
3. Omgekeerde fluoressensiemikroskoop
Hierdie soort mikroskoop se ligbron en kondensor is bo-op geleë en wys na onder. Die beligtingshoek moet 90 grade wees met betrekking tot die oppervlak van die monster wat ondersoek word.
BS-2095F omgekeerde fluoresserende mikroskoop
Wat is die voor- en nadele van fluoressensiemikroskope?
Voordele:
- Maak waarneming van selle in lewende organismes moontlik sonder om hulle te beskadig
- Verskaf hoë resolusie beelde met akkurate kleure
- Maak voorsiening vir die studie van lewende prosesse in selle
- Word gebruik om verskillende tipes molekules binne selle te identifiseer, soos proteïene of nukleïensure.
Nadele:
-Dit laat slegs die waarneming van spesifieke strukture binne 'n sel toe wat met die fluoresserende kleurstof gemerk is.
-Die fotobleiking as gevolg van die elektronopwekking tydens die proses van fluoressensie kan reaktiewe molekules van die fluoresserende kleurstowwe beïnvloed. As gevolg hiervan kan die reaktiewe kleurstowwe hul chemiese eienskap van fluoressensie-emissie-intensiteit verloor.
-Die selle is vatbaar vir die fototoksiese effek na kleuring met fluoresserende kleurstowwe, aangesien die fluorofoor molekules die hoë-energie fotone van die kortgolflengte lig absorbeer.
Wat is die toepassings van 'n fluoressensiemikroskoop?
Fluoresensiemikroskope word wyd gebruik in verskeie velde van navorsing en toepassing, insluitend biochemie, selbiologie, mikrobiologie, immunologie en medisyne.
1. Op die gebied van biologie maak die fluoressensiemikroskoop akkurate en gedetailleerde identifikasie van sellulêre en submikroskopiese sellulêre komponente en aktiwiteite moontlik met behulp van fluoresserende kleurstofetikettering.
2. In die mediese veld kan die fluoressensiemikroskoop fluoresserende reagense gebruik om die teenwoordigheid en verspreiding van bakterieë en virusse op te spoor, of om te help met die etikettering van chirurgiese teikens om chirurgie te vergemaklik.
3. Op die gebied van mineralogie word die fluoressensiemikroskoop dikwels gebruik om stowwe met spontane fluoressensie-eienskappe, soos asfalt, petroleum, steenkool, grafeenoksied en ander minerale, te bestudeer.
4. In materiaalwetenskap kan die fluoressensiemikroskoop in die tekstielbedryf of die papierbedryf gebruik word om veselgebaseerde materiale te ontleed.
Postyd: 14-Mrt-2023